Förstå Illumina-sekvensering: kärnprocessen

Översikt över Illumina Sequencing

Illumina-sekvensering, även känd som Sequencing by Synthesis (SBS), är en allmänt antagen nästa generations sekvenseringsteknik (NGS).

• Den genererar enorma mängder DNA-sekvensdata samtidigt.
• Processen involverar biblioteksförberedelse, klustergenerering, sekvensering och dataanalys.
• Miljontals DNA-fragment sekvenseras parallellt på en flödescell.

Nyckelsteg i Illumina-sekvensering

1. Bibliotekets förberedelser

   Genomiskt DNA eller RNA fragmenteras i mindre bitar.

   • Specifika adaptersekvenser ligeras till båda ändarna av dessa fragment.
   • Dessa adaptrar är avgörande för bindning till flödescellen och för primer-annealing.

2. Klustergenerering

   Det förberedda biblioteket laddas på en flödescell, som innehåller en uppsättning oligonukleotider som är komplementära till adaptrarna.

   • Varje fragment binder till en oligo och genomgår bryggamplifiering, vilket skapar lokala kluster av identiska DNA-mallar.
   • Varje kluster består av cirka 1 000 kopior av ett enda DNA-fragment.

3. Sekvensering genom syntes

   Reversibla terminatorbundna dNTP:er (märkta med distinkta fluorescerande färgämnen) läggs till sekventiellt.

   • Endast en bas ingår per cykel per kluster.
   • Efter inkorporering fångar en kamera den fluorescerande signalen från varje kluster.
   • Det fluorescerande färgämnet och en reversibel terminator klyvs sedan, vilket gör att nästa cykel kan börja.
   • Den här cykeln upprepas hundratals gånger för att bygga en lässekvens.

4. Dataanalys

   Rå bilddata omvandlas till basanrop, som identifierar varje nukleotid i en läsning.

   • Dessa avläsningar justeras sedan till ett referensgenom eller sätts ihop de novo.
   • Ytterligare bioinformatikverktyg används för variantanrop, genuttrycksanalys och andra applikationer.

Jämförelse: Illumina vs. andra sekvenseringstekniker

Copyright ©trylatt.pages.dev 2026